На прошлой неделе мы поделились несколькими соображениями по использованию мембранного электрофореза из ацетата целлюлозы, и сегодня мы закончим эту тему для вашего удобства.
Выбор Концентрация буфера
Концентрация буфера, используемая при мембранном электрофорезе из ацетата целлюлозы, обычно ниже, чем концентрация, используемая при электрофорезе на бумаге.Обычно используемый pH 8,6.BАрбитальный буфер обычно выбирают в диапазоне от 0,05 моль/л до 0,09 моль/л.При выборе концентрации производится предварительное определение.Например, если длина полоски мембраны между электродами в камере электрофореза составляет 8-10 см, на сантиметр длины мембраны необходимо напряжение 25 В, а сила тока должна составлять 0,4-0,5 мА на сантиметр ширины мембраны.Если эти значения не достигаются или не превышаются в ходе электрофореза, концентрацию буфера следует увеличить или разбавить.
Чрезмерно низкая концентрация буфера приведет к быстрому движению полос и увеличению ширины полос.С другой стороны, чрезмерно высокая концентрация буфера замедлит миграцию полос, что затруднит различение определенных полос разделения.
Следует отметить, что при мембранном электрофорезе из ацетата целлюлозы значительная часть тока проходит через образец, что приводит к выделению значительного количества тепла.Иногда выбранную концентрацию буфера можно считать подходящей.Однако в условиях повышенной температуры окружающей среды или при использовании более высокого напряжения испарение воды из-за тепла может усилиться, что приведет к чрезмерно высокой концентрации буфера и даже приведет к высыханию мембраны.
Объем образца
При мембранном электрофорезе из ацетата целлюлозы объем образца определяется различными факторами, включая условия электрофореза, свойства самого образца, методы окрашивания и методы обнаружения.Как правило, чем более чувствителен метод обнаружения, тем меньшим может быть объем пробы, что выгодно для разделения.Если объем образца слишком велик, картина электрофоретического разделения может быть нечеткой, а окрашивание может занять много времени.Однако при количественном анализе разделенных окрашенных полос с использованием элюентных колориметрических методов обнаружения объем пробы не должен быть слишком мал, так как это может привести к снижению значений оптической плотности некоторых компонентов, что приведет к увеличению ошибок при расчете их содержания.В таких случаях объем выборки следует соответствующим образом увеличить.
Обычно объем пробы, добавляемой на каждый сантиметр линии подачи пробы, составляет от 0,1 до 5 мкл, что эквивалентно количеству пробы от 5 до 1000 мкг.Например, при обычном электрофорезе белков сыворотки объем образца, добавляемого на каждый сантиметр линии нанесения, обычно не превышает 1 мкл, что эквивалентно 60–80 мкг белка.Однако при анализе липопротеинов или гликопротеинов с использованием того же метода электрофореза объем образца необходимо соответственно увеличить.
В заключение следует отметить, что наиболее подходящий объем образца следует выбирать исходя из конкретных условий посредством серии предварительных экспериментов.
Выбор окрашивающего раствора
Разделенные полосы при мембранном электрофорезе из ацетата целлюлозы обычно окрашиваются перед обнаружением.Различные компоненты образца требуют разных методов окрашивания, а методы окрашивания, подходящие для мембранного электрофореза из ацетата целлюлозы, могут не полностью применяться к фильтровальной бумаге.
Существует три основных принципа выбора раствора для окрашивания.мембрана из ацетата целлюлозы.Во-первых,Водорастворимым красителям следует отдавать предпочтение перед спирторастворимыми красителями, чтобы избежать усадки и деформации мембраны, вызванной окрашивающим раствором последних.После окрашивания важно промыть мембрану водой и минимизировать продолжительность окрашивания.В противном случае мембрана может скрутиться или сморщиться, что повлияет на последующее обнаружение.
Во-вторых, предпочтительно выбирать красители с сильным сродством к окрашиванию образца.При электрофорезе белков сыворотки на мембране из ацетата целлюлозы обычно используется аминочерный 10B из-за его сильного сродства к окрашиванию различных компонентов сывороточных белков и его стабильности.
В-третьих, следует выбирать надежные качественные красители.Некоторые красители, несмотря на одно и то же название, могут содержать примеси, из-за которых после окрашивания фон становится особенно темным.Это может даже размыть первоначально хорошо разделенные полосы, что затруднит их различение.
Наконец, важен выбор концентрации красящего раствора.Теоретически может показаться, что более высокая концентрация красящего раствора приведет к более тщательному окрашиванию компонентов образца и лучшим результатам окрашивания.Однако, это не так.Сродство связывания компонентов образца с красителем имеет определенный предел, который не увеличивается с увеличением концентрации красящего раствора.Напротив, слишком высокая концентрация красящего раствора не только приводит к потере красителя, но и затрудняет получение четкого фона.Более того, когда интенсивность цвета достигает определенного максимального значения, кривая поглощения красителя не следует линейной зависимости, особенно при количественных измерениях. При мембранном электрофорезе из ацетата целлюлозы концентрация окрашивающего раствора обычно ниже, чем та, которая используется при электрофорезе на бумаге.
Подробная информация о биотехнологии Пекина Люи's мембрана из ацетата целлюлозырезервуар для электрофореза и его применение для электрофореза, пожалуйста, посетите здесь:
лЭксперимент по разделению сывороточного белка с помощью мембраны из ацетата целлюлозы
лМембранный электрофорез из ацетата целлюлозы
Если у вас есть план закупок нашей продукции, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам.Вы можете отправить нам сообщение по электронной почте[электронная почта защищена]или[электронная почта защищена]или позвоните нам по телефону +86 15810650221 или добавьте WhatsApp +86 15810650221 или Wechat: 15810650221.
Ссылка:Электрофорез (второе издание) г-на Ли
Время публикации: 6 июня 2023 г.