Принцип
Электрофорез в пленке ацетата целлюлозы — это метод электрофореза с использованием пленки ацетата целлюлозы в качестве подложки.Явление, при котором заряженные частицы движутся к противоположному электроду под действием электрического поля, называется электрофорезом.Поскольку каждый белок имеет определенную изоэлектрическую точку, если белок поместить в раствор с pH ниже, чем его изоэлектрическая точка, белок будет заряжен положительно и переместится к отрицательному электроду.Напротив, оно движется к положительному полюсу.Поскольку скорость молекул белка, движущихся в электрическом поле, связана с их зарядом, формой и размером молекул, различные белки можно разделить с помощью электрофореза.Сыворотка содержит множество белков, каждый из которых имеет изоэлектрическую точку при pH 7,5 или ниже.Когда сыворотку помещают в буфер с pH 8,6 для проведения электрофореза, все белки сыворотки заряжаются отрицательно и будут двигаться в направлении положительной стороны в электрическом поле.Поскольку различные белки сыворотки имеют разные заряды при одном и том же pH, молекулярные частицы различаются по размеру и, следовательно, скорости миграции различны, и их разделяют с помощью электрофореза.Изоэлектрические точки и молекулярные массы сывороточных белков приведены в таблице ниже:
| Белок | Изоэлектрические точки (ПИ) | Молекулярная масса |
| Альбумин | 4,88 | 69 000 |
| α1-глоулин | 5.00 | 200 000 |
| α2-глоулин | 5.06 | 300 000 |
| β-глоулин | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-глоулин | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
Эксперимент заключается в разделении различных белков в сыворотке крови с помощью мембраны из ацетата целлюлозы (сокр. САМ) в качестве поддерживающей среды.САМ - это разновидность пенопластовых туалетов.eПленка хорошей однородности, толщина 0,1-1,5 мм, обладает определенным водопоглощением.
Материалы, инструменты и реагенты для САМ-электрофореза
Образцы:сыворотка крови здорового человека
Инструмент:источник питания DYY-6C, резервуар для электрофореза DYCP-38C, улучшенная загрузка проб WD-9404
Реагенты
1) мембрана из ацетата целлюлозы 7х9см.
2) Буферный раствор барбитола с pH 8,6 (ионная сила 0,05-0,09, время составляет 0,06 tid): возьмите 1,84 г диэтилбарбитуровой кислоты, а затем возьмите 1,03 г диэтилпентобарбитала натрия, добавьте немного дистиллированной воды, нагрейте до растворения и сделайте до 1000мл;
3) Пятно: Понсо S 0,2 г, трихлоруксусная кислота 3 г, добавить 100 мл дистиллированной воды;
4) TBS/T или PBS/T: 45 мл 95% этанола, 5 мл ледяной уксусной кислоты, добавить 50 мл дистиллированной воды;
5) Чистящий раствор: 70 мл безводного этанола, 30 мл ледяной уксусной кислоты.
Метод экспериментаd
1) Подготовьте мембрану: погрузите мембрану в буферный раствор барбитола на 30 минут-8 часов, выньте, удалите излишки раствора впитывающей бумагой.
2) Загрузка образцов: различите шероховатую и гладкую стороны мембраны и отметьте линию на расстоянии 1,5 см от верхнего края шероховатой стороны.Загружайте образцы с помощью превосходного инструмента для загрузки образцов с шероховатой стороны.Примечание. Образцы следует загружать на шероховатую сторону мембраны.После того, как образцы сыворотки полностью проникли в мембрану, переверните мембрану, положите шершавую сторону (с образцами) лицевой стороной вниз к резервуару, а конец с образцами поместите в отрицательный электрод.
3) Электрофорез: Включите источник питания, 0,4.～Мембрана 0,6 м А/см, время работы 30-45 мин.После проведения электрофореза выключите питание.
4) Окрашивание и очистка: выньте мембрану из резервуара и погрузитеit в раствор красителя на 5 минут, а затем промойте его в чистящем растворе снова и снова 3–4 раза, пока цвет фона не станет прозрачным.Белки сыворотки должны быть показаны на полосах, и обычно существует пять зон, образующих верхний конец отмеченной линии: альбумин, α1-глоулин, α2-глоулин, β-глоулин, γ-глоулин.
5) Консервация: поставить сухой электрофорез.группав чистящем растворе на 10-15 минут, а затем достаньте и наклейте на чистое стекло, после высыхания оно превратится в прозрачную пленкугруппа.
ЭкспериментРезультат
Эффект разделения образцов сыворотки хороший, феномен «хвоста полос» отсутствует.Повторяемость результатов варьируется в зависимости от процедур испытаний и методов экспериментатора, и повторяемость высокая.
Заключение
Система быстрого клинического электрофореза (Емкость для электрофорезаДИКП-38С,источник питанияDYY-6C и превосходная загрузка образцов WD-9404), произведенные нашейкомпания Пекин Люи Биотехнология Лтд.соответствует экспериментальным требованиям,ирезультаты воспроизводимы, просты и быстры, подходят дляпреподаваниеисследовать.
Пекин ЛюиBiotechnology Co., Ltd специализируется на производстве продуктов электрофореза для медико-биологической промышленности, которыеимеет более чем 50-летнюю историю в Китае и может поставлять стабильную и высококачественную продукцию по всему миру.Благодаря многолетним разработкам он достоин вашего выбора!
Сейчас мы ищем партнеров, приветствуются как OEM-резервуары для электрофореза, так и дистрибьюторы.
Для получения дополнительной информации о нас, пожалуйста, свяжитесь с нами по электронной почте[электронная почта защищена]или[электронная почта защищена].
Время публикации: 14 ноября 2022 г.