Гель-электрофорез — один из основных методов, используемых в молекулярной биологии для анализа ДНК. Этот метод включает миграцию фрагментов ДНК через гель, где они разделяются по размеру или форме. Однако сталкивались ли вы когда-нибудь с какими-либо ошибками во время экспериментов по электрофорезу, такими как размазывание полос на агарозном геле или отсутствие полос на геле? В чем может быть причина этих ошибок?
Наши технические специалисты обобщили здесь несколько способов устранения неполадок.
1. Размазанные полосы на агарозном геле.
●ДНК деградировала. Избегайте загрязнения нуклеазой.
● Буфер для электрофореза несвежий. После многократного использования буфера для электрофореза ионная сила снижается, а значение его pH увеличивается, поэтому буферная емкость ослабевает, что влияет на эффект электрофореза. Рекомендуется часто заменять буфер для электрофореза.
● Использовались неправильные условия электрофореза. Не допускайте превышения напряжения 20 В/см и поддерживайте температуру <30°C во время электрофореза. Для электрофореза гигантской цепи ДНК температура должна быть <15° C. Убедитесь, что буфер для электрофореза имеет достаточную буферную емкость.
● В гель было загружено слишком много ДНК. Уменьшить количество ДНК.
● Слишком много соли в ДНК. Используйте осаждение этанолом, чтобы заранее удалить излишки солей.
● ДНК была загрязнена белком. Используйте фенольную экстракцию для более глубокого удаления белка.
● ДНК была денатурирована. Не нагревайте перед электрофорезом. Разбавьте ДНК в буфере с 20 мМ NaCl.
2. Аномалии миграции полос ДНК
● Ренатурация сайта COS фрагмента λHind III. Перед электрофорезом нагрейте ДНК в течение 5 минут при температуре 65°C, а затем охладите ее на льду в течение 5 минут.
● Использовались неправильные условия электрофореза. Не допускайте превышения напряжения 20 В/см и поддерживайте температуру <30°C во время электрофореза. Убедитесь, что буфер для электрофореза имеет достаточную буферную емкость.
● ДНК была денатурирована. Не нагревайте перед электрофорезом. Разбавьте ДНК в буфере с 20 мМ NaCl.
3. Слабые полосы ДНК на агарозном геле или их отсутствие.
● В гель было загружено недостаточное количество или концентрация ДНК. Увеличение количества ДНК. Электрофорез в полиакриламидном геле немного более чувствителен, чем электрофорез в агарозе, и загрузку образца можно соответствующим образом уменьшить.
● ДНК была деградирована. Избегайте загрязнения нуклеазой.
● ДНК подвергали электрофорезу с геля. Электрофорезируйте гель в течение меньшего времени, используйте более низкое напряжение или используйте гель с более высоким процентом содержания.
● Для визуализации ДНК, окрашенной бромидом этидия, использовался неправильный источник света W. Для большей чувствительности используйте коротковолновый (254 нм) свет W.
4. Полосы ДНК отсутствуют.
●ДНК небольшого размера подвергали электрофорезу из геля. Электрофорезируйте гель в течение меньшего времени, используйте более низкое напряжение или используйте гель с более высоким процентом содержания.
● Трудно различить полосы ДНК одинаковой молекулы. Увеличьте время электрофореза и проверьте концентрациюгеля, чтобы убедиться, что процент геля будет использован правильно.
● ДНК была денатурирована. Не нагревайте перед электрофорезом. Разбавьте ДНК в буфере с 20 мМ NaCl.
● Нити ДНК огромны, и обычный гель-электрофорез не подходит. Анализ на импульсном гель-электрофорезе.Какие еще проблемы у вас возникали при электрофорезе в агарозном геле? В будущем мы будем искать больше гидов.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) — специализированная компания, специализирующаяся на продуктах, связанных с электрофорезом, в Китае. Его история начинается в 1970 году, когда Китай еще не вступил в период реформ и открытости. Благодаря многолетнему развитию Liuyi Bitotech имеет собственный бренд, известный на внутреннем рынке продуктов для электрофореза как бренд Liuyi.
Бренд Liuyi имеет более чем 50-летнюю историю в Китае, и компания может поставлять стабильную и высококачественную продукцию по всему миру. Благодаря многолетнему развитию он достоин вашего выбора!
Ячейки для горизонтального электрофореза (резервуары/камеры) Liuyi Biotech отличаются высоким качеством и хорошим внешним видом. Благодаря различным размерам лотков для геля они могут удовлетворить ваши различные экспериментальные требования. У нас есть собственная техническая команда и фабрика. От проектирования до производства, от сырья до ключевых деталей — мы можем контролировать весь процесс. Серия DYCP 31 предназначена для электрофореза ДНК, которые являются модельными.ДИКП-31БН, ДYCP-31CN,ДИКП-31ДН, иДИКП-31Э. Различия между ними заключаются в размерах геля и цене. Мы предоставляем нашим клиентам полноразмерную продукцию. МодельДИКП-32СМогу сделать самый большой гель 250мм*250мм.
Между тем, мы рекомендуем наш источник питания для электрофореза.ДYY-6C,ДYY-6DиДYY-10Cдля наших электрофорезных ячеек (резервуаров/камер) серий DYCP-31 и 32.
Если вам нужна дополнительная информация о продуктах, посетите этот веб-сайт, чтобы получить больше, и свяжитесь с нами по электронной почте, чтобы сообщить нам, что вы хотите, и посмотреть, сможем ли мы предоставить вам решения.
Для получения дополнительной информации о нас, пожалуйста, свяжитесь с нами по электронной почте[электронная почта защищена], [электронная почта защищена].
Время публикации: 09 мая 2022 г.