Что такое электрофорез в полиакриламидном геле?

Электрофорез в полиакриламидном геле

Гель-электрофорез является фундаментальным методом в лабораториях биологических дисциплин, позволяющим разделять макромолекулы, такие как ДНК, РНК и белки. Различные среды и механизмы разделения позволяют более эффективно разделять подмножества этих молекул за счет использования их физических характеристик. В частности, для белков электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ) часто является методом выбора.

ПААГ — это метод разделения макромолекул, таких как белки, на основе их электрофоретической подвижности, то есть способности аналитов перемещаться к электроду с противоположным зарядом. В PAGE это определяется зарядом, размером (молекулярной массой) и формой молекулы. Аналиты движутся через поры, образовавшиеся в полиакриламидном геле. В отличие от ДНК и РНК, белки различаются по заряду в зависимости от включенных в них аминокислот, что может влиять на их работу. Аминокислотные цепочки также могут образовывать вторичные структуры, которые влияют на их видимый размер и, следовательно, на то, как они могут проходить через поры. Поэтому иногда может быть желательно денатурировать белки перед электрофорезом, чтобы линеаризовать их, если требуется более точная оценка размера.

СТРАНИЦА паспорта безопасности

Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия - это метод, используемый для разделения белковых молекул массой от 5 до 250 кДа. Белки разделяются исключительно на основе их молекулярной массы. Додецилсульфат натрия, анионное поверхностно-активное вещество, добавляется при приготовлении гелей, которое маскирует собственные заряды образцов белка и придает им аналогичное соотношение заряда к массе. Проще говоря, он денатурирует белки и придает им отрицательный заряд.

Родная СТРАНИЦА

Нативный PAGE — это метод, в котором для разделения белков используются неденатурированные гели. В отличие от SDS PAGE, при приготовлении гелей не добавляется денатурирующий агент. В результате разделение белков происходит на основе заряда и размера белков. В этом методе конформация, укладка и аминокислотные цепи белков являются факторами, от которых зависит разделение. Белки при этом не повреждаются и могут быть восстановлены после завершения разделения.

Как работает электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE)?

Основной принцип ПААГ заключается в разделении аналитов путем пропускания их через поры полиакриламидного геля с помощью электрического тока. Для этого полимеризуют смесь акриламида и бисакриламида (полиакриламида) добавлением персульфата аммония (АПС). Реакция, катализируемая тетраметилэтилендиамином (TEMED), образует сетчатую структуру с порами, через которые могут перемещаться аналиты (рис. 2). Чем выше процент общего содержания акриламида в геле, тем меньше размер пор и, следовательно, тем меньше белков смогут пройти через них. Соотношение акриламида и бисакриламида также влияет на размер пор, но его часто оставляют постоянным. Меньшие размеры пор также уменьшают скорость, с которой мелкие белки могут перемещаться через гель, улучшая их разрешение и предотвращая их быстрое попадание в буфер при подаче тока.

Оборудование для электрофореза в полиакриламидном геле

Ячейка для гель-электрофореза (резервуар/камера)
Резервуар с гелем для электрофореза в полиакриламидном геле (PAGE) отличается от резервуара с агарозным гелем. Резервуар с агарозным гелем расположен горизонтально, а резервуар PAGE — вертикально. С помощью вертикальной ячейки для электрофореза (резервуар/камера) тонкий гель (обычно 1,0 или 1,5 мм) наливается между двумя стеклянными пластинами и монтируется так, чтобы нижняя часть геля была погружена в буфер в одной камере, а верхняя часть была погружена в буфер. в другой палате. При подаче тока небольшое количество буфера мигрирует через гель из верхней камеры в нижнюю. Благодаря прочным зажимам, гарантирующим удержание узла в вертикальном положении, оборудование обеспечивает быстрое движение геля при равномерном охлаждении, что приводит к образованию четких полос.

Пекинская компания Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) производит ячейки для электрофореза в полиакриламидном геле различных размеров (резервуары/камеры). Модели DYCZ-20C и DYCZ-20G представляют собой ячейки для вертикального электрофореза (резервуары/камеры) для анализа секвенирования ДНК. Некоторые ячейки для вертикального электрофореза (резервуары/камеры) совместимы с системой блоттинга, например, модели DYCZ-24DN, DYCZ-25D и DYCZ-25E совместимы с моделями вестерн-блоттинга DYCZ-40D, DYCZ-40G и DYCZ-40F. которые используются для переноса молекулы белка из геля на мембрану. После электрофореза в ДСН-ПААГ вестерн-блоттинг представляет собой метод обнаружения конкретного белка в белковой смеси. Вы можете выбрать эти системы блоттинга в соответствии с экспериментальными требованиями.

Источник питания для электрофореза
Чтобы обеспечить электричеством гель, вам понадобится источник питания для электрофореза. В Liuyi Biotechnology мы предлагаем широкий выбор источников питания для электрофореза для всех применений. Модели DYY-12 и DYY-12C с высоким стабильным напряжением и током могут удовлетворить требования электрофореза при высоком напряжении. Он имеет функции подставки, синхронизации, VH и пошагового применения. Они идеально подходят для IEF и электрофореза секвенирования ДНК. Для общего применения электрофореза белков и ДНК у нас есть модели DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 и т. д., которые также являются популярными источниками питания с ячейками для электрофореза (резервуарами/камерами). Их можно использовать для электрофореза среднего и низкого напряжения, например, в школьных лабораториях, больничных лабораториях и так далее. Дополнительные модели блоков питания можно найти на нашем сайте.

Бренд Liuyi имеет более чем 50-летнюю историю в Китае, и компания может поставлять стабильную и высококачественную продукцию по всему миру. Благодаря многолетнему развитию он достоин вашего выбора!

Для получения дополнительной информации о нас, пожалуйста, свяжитесь с нами по электронной почте[электронная почта защищена] or [электронная почта защищена].

Ссылки на тему «Что такое электрофорез в полиакриламидном геле?»
1. Карен Стюард, доктор философии Электрофорез в полиакриламидном геле, как он работает, варианты техники и его применение.