Введение
Гель-электрофорез — фундаментальный метод молекулярной биологии, широко используемый для разделения белков, нуклеиновых кислот и других макромолекул. Правильный контроль объема образца, напряжения и времени электрофореза имеет решающее значение для достижения точных и воспроизводимых результатов.Наш коллега из лаборатории предлагаетлучшие практики управления этими параметрами во время гель-электрофореза SDS-PAGE.
Продукты для гель-электрофореза в Пекине Liuyi Biotechnology
Объем пробы: обеспечение единообразия
При проведении электрофореза в ДСН-ПААГ объем образца является ключевым фактором, который может существенно повлиять на разрешение результатов. Обычно рекомендуется загружать 10 мкл общего белка на лунку. Чтобы обеспечить согласованность и предотвратить диффузию образца между соседними лунками, важно загружать равный объем 1x загрузочного буфера в любые пустые лунки. Эта мера предосторожности помогает предотвратить распространение проб на соседние дорожки, что может произойти, если лунку оставить пустой.
Перед загрузкой образцов всегда начинайте с добавления маркера молекулярной массы в одну лунку. Это позволяет легко идентифицировать размеры белка после электрофореза.
Управление напряжением: баланс скорости и разрешения
Напряжение, приложенное во время электрофореза, напрямую влияет как на скорость миграции образцов через гель, так и на разрешение разделения. Для SDS-PAGE рекомендуется начинать с низкого напряжения около 80 В. Это начальное низкое напряжение позволяет образцам мигрировать медленно и равномерно, концентрируя их в острую полосу при попадании в разделительный гель.
Как только образцы полностью войдут в разделительный гель, напряжение можно увеличить до 120 В. Это более высокое напряжение ускоряет миграцию, гарантируя эффективное разделение белков в соответствии с их молекулярной массой. Необходимо следить за продвижением фронта красителя бромфенолового синего, что указывает на завершение электрофореза. Для гелей с концентрацией 10–12% обычно достаточно 80–90 минут; однако для 15% гелей может потребоваться немного увеличить время работы.
Тайм-менеджмент: знать, когда остановиться
Время является еще одним критическим фактором в гель-электрофорезе. Использование геля в течение слишком длительного или слишком короткого периода времени может привести к неоптимальному разделению. Миграция красителя бромфенолового синего является полезным индикатором: когда он достигает дна геля, обычно пора остановить анализ. Для стандартных гелей, таких как 10-12%, обычно достаточно продолжительности электрофореза около 80-90 минут. Для гелей с более высоким процентным содержанием, например 15%, время анализа следует увеличить, чтобы обеспечить полное разделение белков.
Управление буферами: повторное использование и подготовка буферов
Буфер для электрофореза можно использовать повторно 1-2 раза, в зависимости от конкретных условий вашей лаборатории. Однако для достижения оптимальных результатов рекомендуется приготовить свежий 10-кратный буфер и разбавить его непосредственно перед использованием. Это гарантирует, что буфер сохранит свою эффективность, что приведет к более надежным результатам электрофореза.
Продукты для гель-электрофореза в Пекине Liuyi Biotechnology
Тщательно контролируя объем образца, напряжение и время электрофореза, вы можете значительно повысить точность и воспроизводимость результатов гель-электрофореза. Внедрение этих передовых методов в вашу лабораторную работу поможет вам получить более четкие и отчетливые полосы, что приведет к получению более качественных данных для последующего анализа.
Если у вас есть больше хороших методов оптимизации эксперимента по гель-электрофореза, добро пожаловать к нам!
Компания Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) уже более 50 лет специализируется на производстве инструментов для электрофореза и располагает собственной профессиональной технической командой и центром исследований и разработок. У нас есть надежная и полная производственная линия от проектирования до проверки, склад и маркетинговая поддержка. Нашей основной продукцией являются ячейки для электрофореза (резервуары/камеры), источники питания для электрофореза, трансиллюминаторы с синими светодиодами, УФ-трансиллюминаторы, системы изображений и анализа гелей и т. д. Мы также поставляем лабораторные инструменты, такие как инструменты для ПЦР, вихревые смесители и центрифуги для лабораторий.
Если у вас есть план закупок нашей продукции, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам. Вы можете отправить нам сообщение по электронной почте[электронная почта защищена]или[электронная почта защищена]или позвоните нам по телефону +86 15810650221 или добавьте WhatsApp +86 15810650221 или Wechat: 15810650221.
Пожалуйста, отсканируйте QR-код, чтобы добавить его в WhatsApp или WeChat.
Время публикации: 20 августа 2024 г.