Кометный анализ (гель-электрофорез одиночных клеток, SCGE) — это чувствительный и быстрый метод, который в основном используется для обнаружения повреждений и восстановления ДНК в отдельных клетках. Название «Кометный анализ» происходит от характерной кометной формы, которая проявляется в результатах: ядро клетки образует «голову», а поврежденные фрагменты ДНК мигрируют, создавая «хвост», напоминающий комету.
Принцип
Принцип Comet Assay основан на миграции фрагментов ДНК в электрическом поле. Неповрежденная ДНК остается внутри ядра клетки, а поврежденная или фрагментированная ДНК мигрирует к аноду, образуя «хвост» кометы. Длина и интенсивность хвоста прямо пропорциональны степени повреждения ДНК.
Процедура
- Подготовка клеток: Тестируемые клетки смешивают с агарозой с низкой температурой плавления и распределяют по предметным стеклам микроскопа для формирования однородного слоя.
- Лизис клеток: Слайды погружают в раствор для лизиса, чтобы удалить клеточную мембрану и ядерную мембрану, обнажая ДНК.
- Электрофорез: Слайды помещают в камеру для электрофореза в щелочных или нейтральных условиях. Поврежденные фрагменты ДНК мигрируют к положительному электроду под действием электрического поля.
- Окрашивание: После электрофореза предметные стекла окрашивают флуоресцентным красителем (например, бромистым этидием) для визуализации ДНК.
- Микроскопический анализ: с помощью флуоресцентного микроскопа или специального программного обеспечения анализируются формы комет и измеряются такие параметры, как длина хвоста и интенсивность.
Изображение с биорендера
Анализ данных
Результаты Comet Assay оцениваются на основе нескольких ключевых параметров:
- Длина хвоста: представляет расстояние, на которое мигрирует ДНК, указывая степень повреждения ДНК.
- Содержание хвостовой ДНК: процент ДНК, мигрирующей в хвост, часто используется как количественная мера повреждения ДНК.
- Момент оливкового хвоста (OTM): Сочетает длину хвоста и содержание ДНК в хвосте, чтобы обеспечить более полную оценку повреждения ДНК.
Приложения
- Исследования генотоксичности: Анализ Comet широко используется для оценки воздействия химических веществ, лекарств и радиации на клеточную ДНК, что делает его ключевым инструментом для тестирования генотоксичности.
- Экологическая токсикология: помогает анализировать воздействие загрязнителей окружающей среды на ДНК организмов, обеспечивая понимание безопасности экосистем.
- Медицинские и клинические исследования: Анализ Comet используется при изучении механизмов восстановления ДНК, рака и других заболеваний, связанных с ДНК. Он также оценивает влияние методов лечения рака, таких как лучевая терапия и химиотерапия, на ДНК.
- Продовольственные и сельскохозяйственные науки: Используется для оценки безопасности пестицидов, пищевых добавок и других веществ, а также для изучения их токсического воздействия на животных моделях.
Преимущества
- Высокая чувствительность: Способен обнаруживать небольшие уровни повреждений ДНК.
- Простое управление: Методика проста, что делает ее подходящей для высокопроизводительного скрининга.
- Широкое применение: Может применяться к различным типам клеток, включая клетки животных и растений.
- Количественные проблемы: Предоставляя качественные данные о повреждении ДНК, количественный анализ в значительной степени опирается на программное обеспечение и методы анализа изображений.
- Условия эксперимента: На результаты могут влиять такие факторы, как время электрофореза и pH, что требует тщательного контроля условий эксперимента.
Ограничения
Анализ Comet является бесценным инструментом в биомедицинских исследованиях, науке об окружающей среде и разработке лекарств благодаря своей гибкости и высокой чувствительности при обнаружении повреждений и восстановлении ДНК. Пекинская компания Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Люи Биотехнология)предлагает камеру горизонтального электрофореза для анализа комет. Добро пожаловать, свяжитесь с нами, чтобы обсудитьКометный анализпротокол.
Компания Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) уже более 50 лет специализируется на производстве инструментов для электрофореза и располагает собственной профессиональной технической командой и центром исследований и разработок. У нас есть надежная и полная производственная линия от проектирования до проверки, склад и маркетинговая поддержка. Нашей основной продукцией являются ячейки для электрофореза (резервуары/камеры), источники питания для электрофореза, трансиллюминаторы с синими светодиодами, УФ-трансиллюминаторы, системы изображений и анализа гелей и т. д. Мы также поставляем лабораторные инструменты, такие как инструменты для ПЦР, вихревые смесители и центрифуги для лабораторий.
Если у вас есть план закупок нашей продукции, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам. Вы можете отправить нам сообщение по электронной почте[электронная почта защищена]или[электронная почта защищена]или позвоните нам по телефону +86 15810650221 или добавьте WhatsApp +86 15810650221 или Wechat: 15810650221.
Пожалуйста, отсканируйте QR-код, чтобы добавить его в WhatsApp или WeChat.
Время публикации: 20 сентября 2024 г.