Подготовка проб иЗагрузка
Благодаря использованию непрерывной буферной системы без накопительного геля в большинстве случаев образцы должны иметь соответствующую концентрацию и небольшой объем. Используйтепипеткамедленно добавлять образец по 5–10 мкг на лунку, чтобы избежать значительного снижения разрешения. Когдазагрузка образца, питание должно быть отключено. Проба должна содержать индикаторный краситель (0,025 % бромфенолового синего или оранжевого цвета) и сахарозу (10–15 %) или глицерин (5–10 %) для повышения ее плотности, концентрирования пробы и предотвращения диффузии. Однако иногда сахароза или глицерин могут вызывать появление U-образных полос в результатах электрофореза, чего можно избежать, используя 2,5% раствор фиколла (поливинилпирролидона).
Электрофорез
Напряжение для электрофореза составляет 5–15 В/см, обычно около 10 В/см. Для разделения крупных молекул напряжение должно быть меньше, обычно не превышающее 5 В/см.
Окрашивание
Флуоресцентный краситель бромистый этидий (EB) обычно используется для окрашивания для наблюдения полос ДНК в агарозном геле. ЭБ может вставляться между парами оснований молекул ДНК, заставляя ЭБ связываться с ДНК. Поглощение ДНК ультрафиолетового света с длиной волны 260 нм передается ЭТ, а связанный ЭБ излучает флуоресценцию с длиной волны 590 нм в красно-оранжевой области спектра видимого света. Окрашивание геля раствором MgSO4 с концентрацией 1 ммоль/л в течение 1 часа может уменьшить фоновую флуоресценцию, вызванную несвязанными ЭТ, что облегчает обнаружение небольших количеств ДНК.
Краситель ЭБ имеет ряд преимуществ: он прост в использовании, не разрушает нуклеиновые кислоты, обладает высокой чувствительностью и может окрашивать как ДНК, так и РНК. ЭБ можно добавить в образец и отслеживать с помощью УФ-поглощения в любое время. После окрашивания ЭБ можно удалить экстракцией н-бутанолом.
Однако краситель EB является сильным мутагеном, и при обращении с ним следует соблюдать меры предосторожности, например надевать полиэтиленовые перчатки. Акридиновый оранжевый также является широко используемым красителем, поскольку он может различать одноцепочечные и двухцепочечные нуклеиновые кислоты (ДНК, РНК). Он проявляет зеленую флуоресценцию (530 нм) для двухцепочечных нуклеиновых кислот и красную флуоресценцию (640 нм) для одноцепочечных нуклеиновых кислот. Кроме того, для окрашивания можно использовать другие красители, такие как метиленовый синий, метиленовый зеленый и хинолин Б.
Компания Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) уже более 50 лет специализируется на производстве инструментов для электрофореза и располагает собственной профессиональной технической командой и центром исследований и разработок. У нас есть надежная и полная производственная линия от проектирования до проверки, склад и маркетинговая поддержка. Нашей основной продукцией являются ячейки для электрофореза (резервуар/камера), источники питания для электрофореза, синий светодиодный трансиллюминатор, УФ-трансиллюминатор, система изображения и анализа геля и т. д.
Сейчас мы ищем партнеров, приветствуются как OEM-резервуары для электрофореза, так и дистрибьюторы.
Если у вас есть план закупок нашей продукции, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам. Вы можете отправить нам сообщение по электронной почте[электронная почта защищена]или[электронная почта защищена]или позвоните нам по телефону +86 15810650221 или добавьте WhatsApp +86 15810650221 или Wechat: 15810650221.
Пожалуйста, отсканируйте QR-код, чтобы добавить его в WhatsApp или WeChat.
Время публикации: 20 декабря 2023 г.