1. Классификация
Гель-электрофорез делится на вертикальные типы (включая колоночные гели и пластинчатые гели) и горизонтальные типы (в основном пластинчатые гели) (рис. 6-18). Как правило, вертикальное разделение немного превосходит горизонтальное, но приготовление горизонтального геля имеет как минимум четыре преимущества: имеется опора под всем гелем, что позволяет использовать агарозу низкой концентрации; можно приготовить пластинки с агарозным гелем различных характеристик; подготовка геля и загрузка проб более удобны; Камера для электрофореза проста в изготовлении и экономична. Поскольку горизонтальный электрофорез проводится с пластиной агарозного геля, полностью погруженной примерно на 1 мм ниже поверхности буфера для электрофореза, его также называют погружным электрофорезом.
Емкость для электрофореза DYCP-31DN для электрофореза в агарозном геле
2. Буферная система
При разделении нуклеиновых кислот в большинстве систем используются системы непрерывного действия. Обычно используемые буферы для электрофореза включают буфер TBE (0,08 моль/л трис·HCl, pH 8,5, 0,08 моль/л борной кислоты, 0,0024 моль/л ЭДТА) и буфер THE (0,04 моль/л трис·HCl, pH 7,8, 0,02 моль/л). ацетат натрия, 0,0018 моль/л ЭДТА) буфер. Эти буферы обычно готовят в виде 10-кратных исходных растворов и при использовании разбавляют до необходимой концентрации. Скорость миграции линейной и кольцевой ДНК в агарозном геле варьируется в зависимости от используемого буфера. В буфере THE скорость миграции линейной ДНК выше, чем у кольцевой ДНК, тогда как в буфере TBE все наоборот.
3.Приготовление агарозного геля
(1) Приготовление горизонтального агарозного геля
(а) Приготовьте агарозный гель необходимой концентрации, используя 1x буфер для электрофореза.
(б) Нагрейте агарозу до полного растворения на кипящей водяной бане, на магнитной мешалке или в микроволновой печи. Охладите раствор агарозы до 55°C и добавьте краситель бромистого этидия (EB) до конечной концентрации 0,5 мкг/мл.
(в) Запечатайте края стеклянных или акриловых пластинок небольшим количеством агарозного геля, добавьте расческу и расположите зубья расчески примерно на 0,5–1,0 мм над пластинкой.
(d) Непрерывно выливайте расплавленный раствор агарозного геля в форму из стеклянной или акриловой пластины (толщина зависит от объема образца ДНК), избегая попадания пузырьков воздуха. Дайте ему затвердеть естественным путем при комнатной температуре.
(д) Осторожно снимите гребенку после полного затвердевания. Добавьте необходимое количество буфера для электрофореза в резервуар с гелем, убедившись, что гелевая пластина погружена примерно на 1 мм ниже поверхности буфера для электрофореза.
(2) Приготовление вертикального агарозного геля
(а) Удалите жир или остатки со стеклянных пластин, промыв их этанолом.
(b) Поместите распорные пластины между передней и задней перегородками, совместите края распорных пластин с передней и задней перегородками и закрепите их зажимами.
(c) Добавьте 2% агарозы в 1x буфере между краями разделительных пластин, чтобы сформировать агарозную пробку высотой 1 см в нижней части камеры для отливки геля.
(d) Вылейте расплавленный агарозный гель нужной концентрации, приготовленный в 1x буфере, в камеру для геля на глубину до 1 см ниже верха.
(e) Вставьте расческу, избегая попадания пузырьков воздуха под зубьями расчески. Иногда во время охлаждения агарозного геля на зубцах расчески могут появляться складки; в таких случаях просто добавьте сверху немного расплавленной агарозы, чтобы она затвердела.
(f) Снимите гребенку. Чтобы предотвратить утечку буфера в загрузочном слоте, загерметизируйте соединение между пластиной агарозного геля и камерой электрофореза 2% агарозой и добавьте необходимое количество буфера.
(g) Добавьте 1x буфер для электрофореза в гелевую камеру.
(h) Аккуратно загрузите образцы ДНК в агарозный гель под буфером.
Более подробной информацией об основных знаниях об электрофорезе в агарозном геле мы поделимся на следующей неделе. Желаю, чтобы эта информация помогла вашему эксперименту.
Компания Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) уже более 50 лет специализируется на производстве инструментов для электрофореза и располагает собственной профессиональной технической командой и центром исследований и разработок. У нас есть надежная и полная производственная линия от проектирования до проверки, склад и маркетинговая поддержка. Нашей основной продукцией являются ячейки для электрофореза (резервуар/камера), источники питания для электрофореза, синий светодиодный трансиллюминатор, УФ-трансиллюминатор, система изображения и анализа геля и т. д.
Сейчас мы ищем партнеров, приветствуются как OEM-резервуары для электрофореза, так и дистрибьюторы.
Если у вас есть план закупок нашей продукции, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам. Вы можете отправить нам сообщение по электронной почте[электронная почта защищена]или[электронная почта защищена]или позвоните нам по телефону +86 15810650221 или добавьте WhatsApp +86 15810650221 или Wechat: 15810650221.
Пожалуйста, отсканируйте QR-код, чтобы добавить его в WhatsApp или WeChat.
Время публикации: 7 декабря 2023 г.